Description:
Die spezifische Inhibition der Genexpression spielt bei experimentellen Strategien, die gezielt auf molekularer Ebene das Wachstum von Tumoren beeinflussen zunehmend eine immer größer werdende Rolle. In dieser Areit wurde durch den Einsatz spezifischer, synthetischer, 21nt-langer siRNAs die Bedeutung einzelner Moleküle für die Erucylphosphocholin-induzierte Apoptose untersucht. Als Modellsystem dienten die humanen Glioblastomzelllinien A172, U118MG und U373MG. Das Ausmaß der Proteinexpression wurde mit Hilfe der Western-Blot-Analyse bestimmt. Am in vitro-Modell humaner Hirntumorzelllinien konnte durch einen einfachen morphologischen Test gezeigt werden, dass die Methode der RNA-Interferenz auch in diesen Zellen anwendbar ist. In einem zweiten Schritt wurd die RNA-Interferenzmethode mit Hilfe einer spezifischen siRNA gegen die mRNA des Zytoskelettproteins Lamin A/C etabliert. Dazu wurden die Transfektionsparameter Zellzahl Konzentration der verwendetetn siRNA und die Konzentration des Transfektionsreagenzes Oligofectamin für die Modellzelllinien optimiert. Die Spezifität der Methode konnte durch den Einsatz einer Kontroll-siRNA gegen Luciferase untermauert werden. In einem dritten Schritt wurde die RNA-Interferenztechnik, unter dengefundenen optimierten Transfektionsbedingungen, an den für die Apoptose relevanten Genen Apaf-1, Caspase-3 und -2 validiert ...