Published:
[Erscheinungsort nicht ermittelbar]: Universitat Autònoma de Barcelona, 2016
Language:
English
Identifier:
Origination:
University thesis:
Dissertation, Universitat Autònoma de Barcelona, 2016
Footnote:
Description:
El treball de recerca realitzat en aquesta Tesi Doctoral està dirigit a la millora del desenvolupament de la vacuna contra el VIH basada en BCG recombinant. La Tesi Doctoral inclou tres articles de recerca publicats en revistes peer-reviewed" i una patent depositada a la Oficina Europea de Patents. Inicialment, hem avaluat la influencia de l'edat i la ruta d'immunització en la inducció de respostes immunes especifiques front a VIH i M. tuberculosis després d'immunitzar ratolins BALB/c recent nascuts i adults amb BCG.HIVA222 i reforçar-los amb Modified Virus Ankara (MVA).HIVA. Les freqüències de cèl·lules CD8+ productores de IFN- γ eren superiors en ratolins adults vacunats per via intradèrmica i menors en ratolins adults i recent nascuts vacunats per via subcutànea. En tots els casos la producció de IFN-γ era significativament superior en ratolins induïts amb BCG.HIVA222 en comparació dels ratolins induïts amb BCGwt. Quan l'activitat Citotòxica dels limfòcits T (CTL) específica pel VIH es va comprovar, les freqüències de toxicitat específica eren superiors en ratolins recent nascuts que en ratolins adults. El programa vacunal d'inducció-reforç heteròleg amb BCG.HIVA222 i MVA.HIVA va ésser segur en ratolins recent nascuts. L'administració de BCG.HIVA222 a ratolins recent nascuts és segura i immunogènica i va augmentar la resposta específica front a VIH induïda per la vacuna MVA.HIVA. Seguidament, vàrem construir el pJH222.HIVACAT, un plasmidi llançadora que expressava l'immunogen de VIH subtipus A HIVA. Aquest vector llançadora utilitza un mecanisme lliure de resistències a antibiòtic basat en un sistema de Titració del Repressor de l'Operador (ORT) per la selecció i manteniment del plasmidi en cèl·lules E. coli i una complementació de lisina en micobactèria. Aquest vector llançadora es va electroporar una soca de BCG auxotròfica per lisina per generar la soca vacunal BCG.HIVACAT. Vàrem demostrar que el plasmidi episomal pJH222.HIVACAT era estable in vivo per un període de 20 setmanes, i vàrem caracteritzar genèticament i fenotípica la soca vacunal BCG.HIVACAT. La vacuna BCG.HIVACAT en combinació amb MVA.HIVA indueix una resposta de cèl·lules T productores de IFN- γ especifiques per VIH i M. tuberculosis. Per altra banda, quan es varen induir ratolins adults amb BCG.HIVACAT i es varen reforçar amb MVA.HIVA.85A, es varen induir cèl·lules T CD8+ especifiques per VIH que produïen IFN-γ, TNF-α, IL-2 i CD107a al ésser estimulades. Per tant, vàrem demostrat la immunogenicitat per cèl·lules T de una nova vacuna, més segura, compatible amb GLP, basada en BCG recombinant que expressa l'immunogen prototipus HIVA. Finalment, hem construït un nou disseny de vacuna basada en micobactèria mitjançant la utilització d'un sistema de selecció de plasmidis lliure de resistència a antibiòtics. Hem construït un nou plasmidi llançadora per E. coli i micobactèria que expressa l'immunogen HIVA. Aquest vector llançadora utilitza un sistema de selecció i manteniment de plasmidis sense resistències a antibiòtics, que es basa en la complementació de glicina en E. coli i la complementació de lisina en micobactèria. Aquest plasmidi primer es va tranformar en una soca d'E. coli auxotròfica per glicina, i llavors es va transformar en una soca de BCG auxotròfica per lisina per generar la soca vacunal BCG. HIVA2auxo. Vàrem demostrar que el plasmidi episomal p2auxo.HIVA era estable in vivo per un període de 7 setmanes, i vàrem fer la caracterizació genètica i fenotípica de la soca vacunal BCG.HIVA2auxo. La vacuna BCG.HIVA2auxo, en combinació amb MVA.HIVA, va ésser segura i va produir cèl·lules T productores de IFN-γ especifiques per VIH i M. tuberculosis en ratolins BALB/c adults. Es varen induir cèl·lules T CD8+ polifuncionals especifiques per VIH que produïen IFN-γ, TNF-α i expressaven el marcador de degranulació CD107a. Així, hem construït una nova vacuna basada en BCG més segura i compatible amb les GLP fent servir l'immunogen HIVA. Aquests sistema de selecció de plasmidis lliure de resistències a antibiòtics basat en la doble complementació d'auxotrofies podria ésser una nova plataforma vacunal micobacteriana per desenvolupar no només BCG recombinant que expressa immunògens de VIH de segona generació, sinó també d'altres patògens d'interès pediàtric per induir resposta protectiva just després de néixer.