Beschreibung:
Hengstsamen, Verdünner, geschlechtsspezifisch sortierter Spermien. - Ziel der vorliegenden Arbeit war es, das Aufbereitungsprotokoll für Hengstsamen so anzupassen, dass die Spermien mit dem Fluoreszenzfarbstoff Vibrant® DyeCycle™Violet Stain angefärbt werden können, der als Ersatz für den Farbstoff Hoechst33342 dienen soll. In einem Vorversuch zeigte sich, dass ein neuer phosphatfreier Verdünner zu entwickeln ist, um eine ausreichende Spermaqualität zu erhalten. In den Hauptversuchen wurden gezeigt, dass es möglich ist, Hengstsamen in dem neu entwickelten Verdünner „Ka-Mops“ aufzubereiten und vergleichbare Ergebnisse wie bei der Nutzung des etablierten Verdünners KMT zu erzielen. Dafür wurden die frischen Ejakulate aufgeteilt und mit KMT und Ka-Mops verdünnt. Für die Auswertung wurde ein Thermotoleranztest bei 38°C durchgeführt. Bei 0,3 und 6 Stunden wurden Motilität und morphologische Integrität beurteilt sowie der akrosomale Status gemessen. Bei Hengst I waren nach 0, 3 und 6 Stunden bei KMT 78,7, 73,3 und 69,5% der Spermien und bei Ka-Mops 81,4, 78,8 und 73,3% morphologisch unverändert. Bei Hengst II waren bei KMT 77,4, 72,3 und 69,0 % im Vergleich zu Ka-Mops 80,6, 75,9 und 70,1% der Spermien morphologisch unverändert. Beim Vergleich der Motilität zeigten sich bei Hengst I nach 0, 3 und 6 Stunden bei KMT folgende Ergebnisse: 78,7, 73,3 und 69,6% der Spermien als motil bei Ka-Mops 81,4, 78,8 und 73,3%. Bei Hengst II zeigten sich bei KMT 77,4, 72,3 und 69,0 %, bei Ka-Mops 80,6, 75,9 und 70,1% als motil. Bei der flowzytometrischen Analyse zeigten sich bei Hengst I bei KMT 58,9, 59,5 und 58,0% der Spermien FITC/PNA PI negativ und bei Ka-Mops 54,2, 58,3 und 65,6%. Bei Hengst II lagen die Werte bei 60,7, 73,9 und 69,2% und 51,0, 54,0 und 54,2%. Im Vergleich zwischen dem neu entwickelten Tiefgefrierverdünner TG-Mops und dem am Niedersächsischen Landgestüt genutzten TG-Celle (INRA82 + 2,5% Eigelb und 2,5% Glycerol) wurden die Ejakulate zunächst in gleicher Weise wie für den Frischsamenversuch aufbereitet. Anschließend wurden zu den Proben der Tiefgefrierverdünner zugefügt. In den Konzentrationen 100 und 50x106 Spermien pro ml wurden die Proben nun in 0,25ml Pailletten kryokonserviert. Nach dem Auftauen zeigten sich keine signifikanten Unterschiede in der Spermienqualität zwischen den unterschiedlich aufbereiteten Proben. Hierzu zeigten sich bei der Morphologie folgende Werte: Hengst I Konzentration 100x106 Spermien/ml Verdünnerkombination...